Plasmide Double Nickase (h) Thrombin R: sc-400556-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Thrombin R correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Thrombin R Double Nickase (h) et le plasmide Thrombin R Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant F2R. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Thrombin R Antibody (ATAP2): sc-13503
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Thrombin R | sc-400556-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Thrombin R | sc-400556-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F2R code le récepteur de la thrombine (récepteur activé par les protéases 1, PAR1), un RCPG activé par un clivage protéolytique médié par la thrombine qui expose un ligand intramoléculaire (« tethered ligand ») et déclenche une signalisation via les voies Gαq, Gα12/13 et Gαi. L’activation de PAR1 régule l’activation plaquettaire, la fonction de barrière endothéliale, le tonus vasculaire et le trafic des leucocytes, via des voies de signalisation en aval impliquant MAPK, RhoA/ROCK, PI3K-AKT et NF-κB. En intégrant les signaux de coagulation et d’inflammation, F2R contribue à l’hémostase, à la thrombo-inflammation et au remodelage tissulaire. Une signalisation PAR1 dérégulée a été associée à la thrombose, à l’athérosclérose, à la coagulopathie associée au sepsis, à la fibrose et aux interactions avec le microenvironnement tumoral, ce qui étaye des études mécanistiques en biologie vasculaire et en recherche sur le cancer.
Thrombin R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F2R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F2R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F2R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F2R.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.