Plasmide CRISPR/Cas9 KO Thrombin R (m): sc-420264

Présentation

F2r code le récepteur de la thrombine (récepteur activé par les protéases‑1, PAR1), un RCPG activé par un clivage protéolytique dépendant de la thrombine qui expose un ligand attaché, déclenchant une signalisation intracellulaire via les voies Gαq, Gα12/13 et Gαi. Dans les cellules de souris, le récepteur de la thrombine régule les réponses plaquettaires et endothéliales, le tonus vasculaire, la fonction de barrière et la signalisation inflammatoire, via les voies en aval MAPK/ERK, RhoA/ROCK, la mobilisation du Ca²⁺ par PLCβ, ainsi que des programmes transcriptionnels associés à NF‑κB. L’activité de F2r intègre la coagulation aux réponses cellulaires aux lésions tissulaires et au stress hémostatique, influençant la communication croisée thrombo‑inflammatoire et le remodelage vasculaire. Une signalisation PAR1 dérégulée a été associée à des modèles de thrombose, d’athérosclérose, de dysfonction vasculaire liée au sepsis et d’interactions tumeur‑stroma dans le microenvironnement, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des maladies vasculaires et inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Thrombin R (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène F2r dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du F2r, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert F2r à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Thrombin R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en F2r pour l'étude de la signalisation de Thrombin R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de F2r essentiels à la fonction de Thrombin R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de F2r pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Thrombin R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Thrombin R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus F2r. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Thrombin R plasmide HDR (m) et le Thrombin R (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie F2r pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles F2r définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.