THP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401238

概要

UMODは、太い上行脚の上皮細胞で産生され、分泌経路でのプロセシングを経て尿中に分泌される、非常に豊富な糖タンパク質であるウロモジュリン（THP）をコードします。THPは、ポリマー形成、イオン輸送過程の調節、ならびに尿路における免疫系・細胞外マトリックス成分との相互作用を通じて、尿細管の恒常性維持に寄与します。UMODに関連する細胞表現型には、タンパク質のフォールディング／輸送の異常、ERストレス、尿細管機能の破綻などが含まれ、成熟過程や頂端側への放出に対する感受性を反映しています。UMODの遺伝的変異や機能不全は、遺伝性腎疾患や慢性腎臓病への感受性と関連しており、腎上皮細胞の生物学やプロテオスタシス経路を研究するうえで有用な遺伝子座です。

THP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUMOD遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UMOD内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UMODのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、THPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、THPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UMOD欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• THPの機能に不可欠なUMODエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UMODゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• THP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTHP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UMOD遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  THP HDRプラスミド（h）および THP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUMODホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUMOD標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。