Plasmide CRISPR/Cas9 KO THP (h): sc-401238

Présentation

UMOD code l’uromoduline (THP), une glycoprotéine très abondante produite par les cellules épithéliales de la branche ascendante large de l’anse de Henle et sécrétée dans l’urine après maturation au sein de la voie sécrétoire. La THP contribue à l’homéostasie tubulaire via la formation de polymères, la régulation des processus de transport ionique et des interactions avec des composants immunitaires et de la matrice extracellulaire dans les voies urinaires. Parmi les phénotypes cellulaires associés à UMOD figurent une altération du repliement et/ou du trafic de la protéine, un stress du réticulum endoplasmique (RE) et une perturbation de la fonction tubulaire, reflétant sa sensibilité aux étapes de maturation et de libération apicale. La variation génétique ou le dysfonctionnement de UMOD est associé à des maladies rénales héréditaires et à une susceptibilité à la maladie rénale chronique, ce qui en fait un locus utile pour étudier la biologie de l’épithélium rénal et les voies de protéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO THP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UMOD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UMOD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UMOD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine THP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UMOD pour l'étude de la signalisation de THP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UMOD essentiels à la fonction de THP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UMOD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le THP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le THP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UMOD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le THP plasmide HDR (h) et le THP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UMOD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UMOD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.