Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGIF2: sc-416231-ACT

Le gène humain TGIF2 (TG-interacting factor 2) code un régulateur transcriptionnel à homéoboîte de la classe TALE, qui module des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destin cellulaire, la prolifération et la différenciation. TGIF2 agit principalement comme corépresseur transcriptionnel en s’associant aux protéines SMAD et en recrutant des complexes corépresseurs, façonnant ainsi les sorties de signalisation TGF-β/SMAD et, plus largement, les réseaux transcriptionnels du développement. Grâce à ces interactions, TGIF2 influence des programmes liés à la transition épithélio-mésenchymateuse, la spécification de lignée et le contrôle de la croissance dépendant du contexte. Une expression ou une activité dérégulée de TGIF2 a été associée à des états transcriptionnels altérés observés dans des troubles du développement et des cancers, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation génique dépendante des voies de signalisation.

TGIF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGIF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGIF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGIF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGIF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGIF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGIF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGIF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGIF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGIF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.