Plásmido Doble Nickase (h) TGF beta Receptor 2/TGFBR2: sc-400144-NIC

TGFBR2 codifica el receptor 2 del factor de crecimiento transformante beta (TGF-βR2), una quinasa transmembrana de serina/treonina que se une a ligandos TGF-β e inicia la señalización canónica de SMAD2/3 mediante la fosforilación de TGFBR1, además de establecer interacciones (crosstalk) con las vías MAPK, PI3K/AKT y de la familia Rho. A través de estas redes, TGF-βR2 regula la transición epitelio-mesenquimal, el control del ciclo celular, la modulación inmunitaria y la homeostasis de la matriz extracelular, influyendo en el desarrollo tisular y la reparación de heridas. La alteración de la función o la expresión de TGFBR2 perturba la fidelidad de la vía y se asocia con programas de fibrosis desregulados y procesos oncogénicos, incluidos cambios en la inhibición del crecimiento, la invasión y la señalización del microambiente tumoral. Dado que la señalización de TGF-β depende en gran medida del contexto, TGFBR2 se estudia con frecuencia para desentrañar respuestas transcripcionales específicas de cada tipo celular y el control por retroalimentación dentro de circuitos de citocinas y respuesta al estrés.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TGFBR2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TGFBR2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TGFBR2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TGFBR2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.