Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGF beta Receptor 2/TGFBR2: sc-400144-ACT

TGFBR2 code le récepteur de type II du transforming growth factor beta (TGF‑β), une kinase transmembranaire sérine/thréonine qui initie la signalisation canonique SMAD2/3 après liaison du ligand et formation d’un complexe de récepteurs avec des récepteurs de type I. Par ces voies, TGFBR2 régule le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation, l’apoptose, la modulation immunitaire et le remodelage de la matrice extracellulaire, et il interfère également avec des voies de signalisation non canoniques telles que MAPK, PI3K/AKT et les GTPases de la famille Rho. Une signalisation TGF‑β/TGFBR2 dérégulée est impliquée dans la fibrose, l’altération de la surveillance immunitaire, la transition épithélio‑mésenchymateuse et la biologie du microenvironnement tumoral, tandis que des variants avec perte de fonction sont associés à une homéostasie tissulaire aberrante et à un remodelage des voies de signalisation lié au cancer. En conséquence, TGFBR2 constitue un nœud clé pour étudier l’opposition, dépendante du contexte, entre l’inhibition de la croissance et des programmes transcriptionnels promigratoires et profibrotiques.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGFBR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGFBR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGFBR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGF beta Receptor 2/TGFBR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGFBR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGF beta Receptor 2/TGFBR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGF beta Receptor 2/TGFBR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGFBR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.