Particules Lentivirales d'Activation (h) TGF beta Receptor 1/TGFBR1: sc-400153-LAC

TGFBR1 code le récepteur 1 du facteur de croissance transformant bêta (TGF-βRI/ALK5), une sérine/thréonine kinase qui convertit les ligands TGF-β en programmes de signalisation intracellulaire contrôlant la prolifération, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et la modulation immunitaire. Lors de la liaison du ligand à TGFBR2, TGFBR1 est activé et phosphoryle SMAD2/3, coordonnant une transcription canonique dépendante de SMAD4, tout en mobilisant aussi des voies non canoniques telles que MAPK, PI3K/AKT et la signalisation via des GTPases de type Rho. Ces voies régulent la transition épithélio-mésenchymateuse, l’activation des fibroblastes et les points de contrôle du cycle cellulaire, faisant de TGFBR1 un nœud central de l’homéostasie tissulaire. Une signalisation TGFBR1 dérégulée est impliquée dans la fibrose et divers cancers, et est également associée à des maladies héréditaires du tissu conjonctif et des atteintes vasculaires via une altération du contrôle de la voie TGF-β.

Les particules d'activation lentivirales TGF beta Receptor 1/TGFBR1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TGFBR1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TGF beta Receptor 1/TGFBR1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TGFBR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TGF beta Receptor 1/TGFBR1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TGFBR1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.