Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGFβ3: sc-400768-ACT

TGFB3 code le transforming growth factor bêta 3 (TGFβ3), une cytokine sécrétée de la superfamille TGF-β qui signale principalement via TGFBR1/2 pour activer SMAD2/3 et moduler des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et la régulation immunitaire. TGFβ3 interagit également avec des voies non canoniques, notamment MAPK, PI3K/AKT et la signalisation des GTPases de type Rho, influençant la transition épithélio-mésenchymateuse, la réparation des plaies et l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la signalisation TGFB3/TGF-β est impliquée dans le remodelage associé à la fibrose, des altérations du patterning développemental et la dynamique du microenvironnement tumoral, où une signalisation modifiée peut façonner les réponses stromales et l’immunosuppression. Ces fonctions font de TGFB3 un nœud clé pour l’étude de la régulation dépendante du contexte du destin cellulaire et de la biologie de la matrice dans les systèmes humains.

TGFβ3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGFB3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGFβ3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGFB3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGFB3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGFβ3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGFB3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGFβ3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGFβ3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGFB3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.