Plasmide Double Nickase (h) TGF beta 1: sc-400067-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TGF beta 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TGF beta 1 Double Nickase (h) et le plasmide TGF beta 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TGFB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TGF beta 1 Antibody (3C11): sc-130348
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TGF beta 1 | sc-400067-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TGF beta 1 | sc-400067-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TGFB1 code le transforming growth factor bêta 1 (TGF‑β1), une cytokine sécrétée qui transmet son signal via TGFBR1/2 afin d’activer une transcription dépendante de SMAD2/3 et d’interagir avec les voies MAPK, PI3K/AKT et des GTPases Rho. Il s’agit d’un régulateur central du remodelage de la matrice extracellulaire, de la transition épithélio‑mésenchymateuse, de l’immunosuppression et des programmes de cicatrisation, influençant l’arrêt du cycle cellulaire et la différenciation de manière dépendante du contexte. Une signalisation TGF‑β1 dérégulée est impliquée dans les troubles fibrosants, le remodelage du microenvironnement tumoral et une inflammation aberrante, faisant de TGFB1 un nœud fréquemment étudié pour analyser les interactions entre les compartiments stromal et immunitaire.
TGF beta 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TGFB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TGFB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TGFB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TGFB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.