TGF beta 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400067-ACT

TGFB1 codifica o fator de crescimento transformador beta 1 (TGF‑β1), uma citocina secretada pleiotrópica sintetizada como um complexo latente e ativada no meio extracelular para regular decisões de destino celular. Por meio da sinalização canônica SMAD2/3 e da comunicação cruzada com as vias MAPK, PI3K/AKT e Rho GTPase, o TGF‑β1 controla a deposição de matriz extracelular, a transição epitélio–mesênquima, a imunossupressão e a remodelação tecidual. A atividade desregulada de TGFB1 está implicada em fibrose, inflamação crônica, reparo de feridas prejudicado e sinalização no microambiente tumoral, tornando-o um nó central para estudar o controle do crescimento dependente do contexto e as interações entre estroma e sistema imune. Seus amplos efeitos parácrinos também sustentam investigações de programas de diferenciação e de redes transcricionais induzidas por citocinas em diversos modelos celulares humanos.

TGF beta 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGF beta 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGF beta 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGF beta 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGF beta 1 em células tumorais com expressão de TGFB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.