Plasmide CRISPR/Cas9 KO TGase3 (h): sc-406800

Présentation

TGM3 code la transglutaminase 3 (TGase3), une enzyme dépendante du calcium qui catalyse la réticulation des protéines via la formation de liaisons isopeptidiques ε-(γ-glutamyl)lysine. TGase3 est surtout connue pour son rôle dans les programmes de différenciation terminale, en contribuant à la stabilisation du cytosquelette et des assemblages protéiques extracellulaires lors de la maturation épithéliale et de la formation de la barrière. Son activité interfère avec des voies qui régissent la différenciation des kératinocytes, la réparation des plaies et le remodelage des protéines structurales, reliant la réticulation enzymatique à l’homéostasie tissulaire. Une activité des transglutaminases dérégulée et une expression modifiée de TGM3 ont été associées à des processus inflammatoires et néoplasiques dans les tissus épithéliaux, ce qui soutient l’étude de TGase3 dans des états de différenciation pertinents pour la maladie et dans la biologie tumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TGase3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TGM3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TGM3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TGM3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TGase3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TGM3 pour l'étude de la signalisation de TGase3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TGM3 essentiels à la fonction de TGase3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TGM3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TGase3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TGase3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TGM3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TGase3 plasmide HDR (h) et le TGase3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TGM3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TGM3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.