Plasmide Double Nickase (m) TGase2: sc-423375-NIC

Le gène murin **Tgm2** code la transglutaminase 2 (TGase2), une enzyme multifonctionnelle dépendante du Ca²⁺ qui catalyse des réactions de réticulation des protéines, de désamidation et de polyamination, remodelant ainsi la matrice extracellulaire et stabilisant des assemblages protéiques. TGase2 agit également comme protéine de signalisation se liant au GTP et participe à l’adhésion médiée par les intégrines, à la dynamique du cytosquelette et à la régulation des réponses au stress et inflammatoires associées à NF-κB et au TGF-β. Par ces activités, TGase2 influence l’apoptose, l’autophagie, la réparation des plaies et le remodelage fibrotique, et des altérations de l’expression ou de l’activité de TGase2 ont été associées à des modèles de maladies inflammatoires, à la fibrose tissulaire, à la neurodégénérescence et à la biologie du microenvironnement tumoral. **Tgm2** est donc largement utilisé comme point d’entrée pour l’étude de la biologie de la matrice, de la signalisation immunitaire et de l’adaptation cellulaire au stress dans des systèmes murins.

TGase2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tgm2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tgm2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tgm2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tgm2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.