Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGase2: sc-401543-ACT

Le gène humain **TGM2** code la transglutaminase 2 (**TGase2**), une enzyme multifonctionnelle dépendante du Ca2+ qui catalyse la réticulation des protéines et la polyamination, et qui peut également agir comme protéine de signalisation se liant au GTP. TGase2 régule le remodelage du cytosquelette, l’adhérence cellulaire, la stabilisation de la matrice extracellulaire, l’autophagie et l’apoptose, en s’articulant avec la signalisation intégrines/FAK, les programmes inflammatoires liés à NF-κB et les voies de remodelage associées à TGF-β. Par ces mécanismes, une activité altérée de TGase2 a été associée à la fibrose et à des dépôts matriciels anormaux, à des états inflammatoires, ainsi qu’à des phénotypes de survie et d’invasion des cellules tumorales. Sa large localisation subcellulaire et ses fonctions dépendantes du contexte font de TGM2 un nœud pertinent pour des études mécanistiques des réponses au stress et du contrôle du destin cellulaire.

TGase2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGase2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGase2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGase2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGase2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.