TGase1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423374-LAC

Il gene Tgm1 del topo codifica la transglutaminasi 1 (TGase1), un enzima Ca²⁺-dipendente che catalizza legami crociati ε-(γ-glutamil)lisina tra proteine strutturali per assemblare l’involucro corneo insolubile. Questa attività è centrale nella differenziazione terminale dei cheratinociti e nella formazione della barriera epidermica, integrandosi con i processi di cheratinizzazione e di maturazione dello strato corneo. La funzione di TGase1 interseca la segnalazione del calcio e i programmi di differenziamento che coordinano il rimodellamento del citoscheletro e la stabilizzazione della matrice extracellulare alla periferia cellulare. L’alterazione dell’espressione o dell’attività di Tgm1 è ampiamente utilizzata per modellare difetti di barriera e fenotipi cutanei infiammatori, a supporto di studi meccanicistici sulla biologia dell’epidermide e su vie rilevanti per le malattie dermatologiche.

Le particelle di attivazione lentivirale TGase1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tgm1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TGase1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tgm1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TGase1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tgm1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.