Plasmide CRISPR d'Activation (h) TGase1: sc-401487-ACT

Le gène humain **TGM1** code la transglutaminase 1 (TGase1), une enzyme **Ca2+‑dépendante** qui catalyse la formation de liaisons croisées **ε‑(γ‑glutamyl)lysine** entre des protéines structurales lors de la différenciation terminale des kératinocytes. TGase1 est un composant central de l’assemblage de l’enveloppe cornée épidermique, intégrant des signaux issus des programmes de kératinisation et de formation de la barrière afin de stabiliser la couche cornée. Son activité relie les changements de disponibilité des substrats dépendants de la différenciation à la signalisation calcique et à la protéostasie dans les couches supérieures de l’épiderme. Une fonction dérégulée de **TGM1** est associée à des troubles héréditaires de l’intégrité de la barrière cutanée et à une cornification anormale, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud mécanistique pour l’étude de la différenciation épidermique et de la biologie de la barrière.

TGase1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TGM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGase1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TGM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TGM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGase1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TGM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGase1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGase1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TGM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.