Plasmide Double Nickase (h) TFIIIB90-1: sc-405826-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIIB90-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIIB90-1 Double Nickase (h) et le plasmide TFIIIB90-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BRF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIIB90-1/2/3/5 Antibody (A-8): sc-390821
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIIB90-1 | sc-405826-NIC | 20 µg | $410.00 |
BRF1 code TFIIIB90-1, une sous-unité essentielle du facteur de transcription TFIIIB de l’ARN polymérase III, qui coopère avec TBP et BDP1 pour positionner Pol III sur les promoteurs des gènes d’ARNt, de l’ARNr 5S et d’autres loci d’ARN non codants de petite taille. En contrôlant l’initiation par Pol III, TFIIIB90-1 influence la biogenèse des ribosomes, la capacité de traduction et les programmes de croissance cellulaire, reliant la détection des nutriments et la régulation transcriptionnelle sensible au stress à la prolifération. Une production de Pol III dérégulée et une activité anormale des composants de TFIIIB ont été associées, dans divers contextes, à la transformation oncogénique et à une protéostasie altérée, ce qui fait de BRF1 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel des voies biosynthétiques. Les études fonctionnelles de BRF1 recoupent souvent la régulation de la chromatine au niveau des promoteurs Pol III, la progression du cycle cellulaire et la signalisation métabolique qui module le niveau d’activité transcriptionnelle de Pol III.
TFIIIB90-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BRF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BRF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BRF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BRF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.