Plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIIB′′ (m): sc-436781

Présentation

Bdp1 code la sous-unité TFIIIB″ murine, un composant central de la machinerie de transcription de l’ARN polymérase III qui coopère avec les protéines TBP et BRF pour assembler TFIIIB sur les promoteurs de Pol III. TFIIIB″ soutient l’initiation et la réinitiation de la transcription dépendante de Pol III des ARNt, de l’ARNr 5S et d’autres petits ARN non codants, reliant l’activité de Bdp1 à la capacité translationnelle, à la protéostasie et au contrôle de la croissance cellulaire. Comme la production de Pol III est étroitement couplée à la détection des nutriments et aux réponses au stress, une perturbation de Bdp1 peut influencer la progression du cycle cellulaire et l’adaptation métabolique. Une transcription Pol III dérégulée et une fonction altérée de TFIIIB sont fréquemment étudiées dans le contexte des troubles prolifératifs et des voies de stabilité du génome, ce qui fait de Bdp1 une cible utile pour des études mécanistiques dans les cellules de mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIIB″ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Bdp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Bdp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Bdp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TFIIIB″.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Bdp1 pour l'étude de la signalisation de TFIIIB″, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Bdp1 essentiels à la fonction de TFIIIB″
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Bdp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TFIIIB″ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TFIIIB″ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Bdp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TFIIIB″ plasmide HDR (m) et le TFIIIB″ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Bdp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Bdp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.