TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405237

Übersicht

GTF2F1 kodiert die 74-kDa-Untereinheit des Transkriptionsfaktors IIF (TFIIF), auch bekannt als TFIIF RAP 74, eine Kernkomponente der allgemeinen Transkriptionsmaschinerie der RNA-Polymerase II. TFIIF stabilisiert zusammen mit TFIIB und TFIIE den Präinitiationskomplex, unterstützt das Promoter-Clearing und moduliert die Transkriptionselongation, während es zugleich hilft, die Transkription mit der kotranskriptionalen RNA-Prozessierung zu koordinieren. Durch diese Funktionen trägt GTF2F1 zur globalen Kontrolle der Genexpression, zur Zellzyklusprogression sowie zu Reaktionen auf Replikations- oder Transkriptionsstress bei. Eine veränderte Regulation allgemeiner Transkriptionsfaktoren und der Pol-II-Dynamik ist häufig mit entgleisten Proliferationsprogrammen und Genominstabilität verbunden, wodurch GTF2F1 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und bei transkriptionsassoziierten Krankheitsphänotypen darstellt.

Das TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GTF2F1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GTF2F1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GTF2F1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TFIIF RAP 74-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GTF2F1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TFIIF RAP 74-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GTF2F1-Exone abzielen, die für die TFIIF RAP 74-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GTF2F1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GTF2F1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TFIIF RAP 74 HDR-Plasmid (h) und TFIIF RAP 74 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GTF2F1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GTF2F1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.