Plasmide Double Nickase (h) TFIIE-α: sc-404654-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIE-α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIE-α Double Nickase (h) et le plasmide TFIIE-α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GTF2E1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIE-α Antibody (E-2): sc-133064
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIE-α | sc-404654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIE-α | sc-404654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2E1 code la sous-unité α du facteur de transcription IIE (TFIIE-α), un composant essentiel du complexe de pré-initiation de l’ARN polymérase II, nécessaire à une sélection précise du site de démarrage de la transcription. TFIIE coopère avec TFIIF et TFIIH pour favoriser l’ouverture du promoteur et l’initiation de la transcription, reliant ainsi GTF2E1 aux programmes fondamentaux d’expression génique et aux réponses cellulaires dépendant de la transcription pilotée par la Pol II. Par son rôle dans la régulation de la transcription basale, TFIIE-α influence des processus tels que la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le remodelage transcriptionnel adaptatif en réponse au stress. La dérégulation de la machinerie générale de transcription a été impliquée dans des troubles du développement et dans des dépendances transcriptionnelles associées au cancer, faisant de GTF2E1 un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.
TFIIE-α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GTF2E1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GTF2E1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GTF2E1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GTF2E1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.