TFIIE-α Double Nickase Plasmid (h): sc-404654-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFIIE-α Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFIIE-α Double-Nickase-Plasmid (h) und TFIIE-α Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GTF2E1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TFIIE-α: sc-133064
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFIIE-α Double Nickase Plasmid (h) | sc-404654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIE-α Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2E1 kodiert die α‑Untereinheit des Transkriptionsfaktors IIE (TFIIE‑α), einen essenziellen Bestandteil des Präinitiationskomplexes der RNA‑Polymerase II, der für die präzise Auswahl der Transkriptionsstartstelle erforderlich ist. TFIIE wirkt mit TFIIF und TFIIH zusammen, um die Promotoröffnung und die Transkriptionsinitiation zu fördern, und verbindet GTF2E1 damit mit grundlegenden Genexpressionsprogrammen sowie zellulären Antworten, die von der Pol‑II‑vermittelten Transkription abhängen. Über seine Rolle bei der Regulation der basalen Transkription beeinflusst TFIIE‑α Prozesse wie Zellzyklusprogression, Differenzierung und stressadaptive transkriptionelle Umprogrammierung. Eine Fehlregulation der allgemeinen Transkriptionsmaschinerie wird mit Entwicklungsstörungen und krebsassoziierten transkriptionellen Abhängigkeiten in Verbindung gebracht, was GTF2E1 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle macht.
TFIIE-α Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GTF2E1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GTF2E1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GTF2E1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GTF2E1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.