Plásmido CRISPR de Activación (h) TFIID/TATA Binding Protein/TBP: sc-400579-ACT

TBP codifica la proteína de unión a TATA, un componente central conservado del complejo TFIID que reconoce elementos promotores y nuclea el ensamblaje del complejo de preiniciación de la ARN polimerasa II. Al unirse a la caja TATA y coordinar el reclutamiento de factores generales de transcripción, TBP sostiene la transcripción basal e influye en la selección de promotores, la interacción con la cromatina y la dinámica de inicio de la transcripción. TBP también contribuye a programas transcripcionales impulsados por las polimerasas I y III, lo que la vincula con la biogénesis ribosomal, la síntesis de ARNt y la proteostasis global. Las alteraciones en la dosis de TBP o las perturbaciones de su función se han asociado con una expresión génica desregulada y fenotipos neurodegenerativos, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la homeostasis transcripcional en modelos relevantes para enfermedad.

TFIID/TATA Binding Protein/TBP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TFIID/TATA Binding Protein/TBP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TFIID/TATA Binding Protein/TBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TFIID/TATA Binding Protein/TBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TFIID/TATA Binding Protein/TBP en células tumorales con expresión de TBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.