Plasmide Double Nickase (h) TFIIB: sc-401174-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIB Double Nickase (h) et le plasmide TFIIB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GTF2B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIB Antibody (D-3): sc-271736
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIB | sc-401174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIB | sc-401174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GTF2B** code le facteur de transcription IIB (TFIIB), un composant central du complexe de pré-initiation de l’ARN polymérase II, qui fait le lien entre TBP/TFIID au niveau de la boîte TATA et l’ARN polymérase II, et contribue à positionner le site de démarrage de la transcription. TFIIB participe à la reconnaissance du promoteur, à l’initiation de la transcription et aux premières étapes de l’échappement du promoteur, influençant ainsi la production globale d’ARNm et les transitions d’état cellulaire. En raison de son rôle central dans la transcription dépendante de l’ARN polymérase II, toute perturbation de la fonction de TFIIB peut affecter des voies qui contrôlent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. La dérégulation de la machinerie générale de transcription, y compris des facteurs qui modulent la dynamique d’initiation dépendante de TFIIB, a été impliquée dans des programmes transcriptionnels oncogènes et dans d’autres maladies dues à une expression génique altérée.
TFIIB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GTF2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GTF2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GTF2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GTF2B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.