TFEC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406102

Descripción general

TFEC (factor de transcripción EC) codifica un factor de transcripción de tipo hélice‑bucle‑hélice básica con cremallera de leucinas de la familia MiT/TFE, que se une a motivos E‑box para regular programas génicos restringidos a determinados linajes. Se ha estudiado principalmente en la biología del linaje mieloide y de las células pigmentarias, donde puede influir en el estado de diferenciación y en redes transcripcionales que se entrecruzan con la señalización inmunitaria y las respuestas al estrés celular. La actividad de TFEC contribuye al control de salidas transcripcionales implicadas en la identidad celular y en la adaptación a señales del entorno. Programas transcripcionales desregulados de la familia MiT/TFE, incluidas redes asociadas a TFEC, se han relacionado con diferenciación aberrante y firmas de expresión génica vinculadas al cáncer, lo que respalda estudios mecanísticos en contextos de oncogénesis e inmunobiología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TFEC (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TFEC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TFEC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TFEC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TFEC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TFEC para la investigación de la señalización de TFEC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TFEC críticos para la función de TFEC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TFEC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TFEC CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TFEC CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TFEC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TFEC (h) y el plásmido HDR TFEC (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TFEC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TFEC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.