Plasmide Double Nickase (h) TFEB: sc-401388-NIC

TFEB code le facteur de transcription EB, un régulateur majeur de la biogenèse lysosomale et de l’autophagie, qui coordonne l’expression du réseau de gènes CLEAR. En intégrant les signaux de mTORC1 et des voies de détection des nutriments, TFEB contrôle la fonction des lysosomes, la fusion autophagosome–lysosome et l’adaptation cellulaire au stress, notamment oxydatif et protéotoxique. Une activité dérégulée de TFEB a été associée à des altérations de la protéostasie et du contrôle qualité des organites dans la neurodégénérescence, les maladies de surcharge lysosomale, les maladies métaboliques et la biologie du cancer, ce qui en fait un nœud central pour l’étude des mécanismes de clairance intracellulaire. Dans les cellules humaines, les programmes transcriptionnels dépendants de TFEB influencent la signalisation immunitaire et le remodelage inflammatoire via leurs effets sur le trafic endolysosomal et le traitement des antigènes.

TFEB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TFEB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TFEB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TFEB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TFEB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.