TFEB Plasmide Double Nickase (h): sc-401388-NIC

TFEB codifica il fattore di trascrizione EB, un regolatore principale della biogenesi lisosomiale e dell’autofagia che coordina l’espressione della rete genica CLEAR. Integrando i segnali provenienti da mTORC1 e dalle vie di rilevamento dei nutrienti, TFEB controlla la funzione dei lisosomi, la fusione autofagosoma–lisosoma e l’adattamento cellulare allo stress, incluso lo stress ossidativo e proteotossico. Un’attività di TFEB deregolata è stata collegata ad alterazioni della proteostasi e del controllo di qualità degli organelli nella neurodegenerazione, nelle malattie da accumulo lisosomiale, nelle patologie metaboliche e nella biologia del cancro, rendendolo un nodo centrale per gli studi sui meccanismi di clearance intracellulare. Nelle cellule umane, i programmi trascrizionali dipendenti da TFEB influenzano la segnalazione immunitaria e il rimodellamento infiammatorio attraverso effetti sul traffico endolisosomiale e sulla processazione dell’antigene.

TFEB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TFEB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TFEB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TFEB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TFEB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.