Particules Lentivirales d'Activation (m2) TF: sc-420268-LAC-2

Le gène murin F3 code le facteur tissulaire (TF), un initiateur transmembranaire de la voie extrinsèque de la coagulation, qui se lie au facteur VII/VIIa afin de favoriser l’activation en aval du facteur X et la génération de thrombine. Au-delà de l’hémostase, la signalisation du TF s’articule avec des voies dépendantes des récepteurs activés par les protéases (PAR) et influence l’inflammation, le remodelage vasculaire et la migration cellulaire dans des contextes endothéliaux et myéloïdes. Une expression dérégulée de F3/TF est impliquée dans la thrombose pathologique, la coagulopathie associée au sepsis et l’activité procoagulante liée aux tumeurs, ce qui en fait un nœud clé reliant la coagulation aux réponses de l’immunité innée. L’édition génomique de F3 chez la souris soutient des études mécanistiques sur l’assemblage des facteurs de coagulation, la signalisation des PAR induite par le TF, ainsi que des modèles in vivo évaluant les phénotypes thrombo-inflammatoires et les réponses aux lésions vasculaires.

Les particules d'activation lentivirales TF (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de F3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TF (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription F3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif F3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.