Plasmide CRISPR/Cas9 KO TETRAN (h): sc-411436

Présentation

MFSD10 code TETRAN, une protéine membranaire à passages multiples supposée participer à des processus liés au transport de solutés et à l’homéostasie membranaire, ce qui est cohérent avec son appartenance à la superfamille des facilitateurs majeurs (major facilitator superfamily). En tant que facteur putatif de type transporteur, TETRAN présente un intérêt pour l’étude du trafic endomembranaire, de la fonction des organites et de l’adaptation métabolique cellulaire, où des variations des flux de petites molécules peuvent moduler la signalisation de stress et les programmes transcriptionnels en aval. Une expression altérée de MFSD10 a été rapportée dans des jeux de données transcriptomiques dans de multiples contextes pathologiques, ce qui soutient l’exploration de sa contribution au dérèglement du métabolisme et aux transitions d’état cellulaire. Définir la fonction de TETRAN peut aider à clarifier comment les réseaux de transport membranaire influencent des phénotypes de prolifération, de survie et de différenciation dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TETRAN (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MFSD10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MFSD10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MFSD10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TETRAN.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MFSD10 pour l'étude de la signalisation de TETRAN, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MFSD10 essentiels à la fonction de TETRAN
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MFSD10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TETRAN plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TETRAN plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MFSD10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TETRAN plasmide HDR (h) et le TETRAN (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MFSD10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MFSD10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.