Plasmide CRISPR d'Activation (m) TET1: sc-424616-ACT

Le gène murin *Tet1* code la dioxygénase TET1, un régulateur épigénétique majeur qui catalyse l’oxydation de la 5‑méthylcytosine en 5‑hydroxyméthylcytosine et en dérivés apparentés, favorisant la déméthylation de l’ADN et modulant l’accessibilité de la chromatine. L’activité de TET1 influence des programmes transcriptionnels qui gouvernent le développement embryonnaire, l’engagement des lignages, la régulation des gènes neuronaux et le maintien de l’identité cellulaire, via une coordination avec les voies de méthylation et de remodelage de la chromatine. En modulant les paysages de méthylation des CpG, TET1 affecte la stabilité du génome ainsi que la fonction des enhancers et des promoteurs, ce qui l’associe à une différenciation dérégulée et à des états d’expression génique aberrants observés dans divers modèles pertinents pour l’étude des maladies. Dans les systèmes murins, la perturbation de *Tet1* est couramment étudiée dans le contexte du neurodéveloppement, de la biologie des cellules souches et des dynamiques de l’épigénome qui influencent les réponses au stress cellulaire et la signalisation inflammatoire.

TET1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tet1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TET1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tet1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tet1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TET1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tet1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TET1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TET1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tet1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.