Plasmide CRISPR/Cas9 KO TESPA1 (h): sc-406563

Présentation

TESPA1 (thymocyte-expressed, positive selection-associated 1) code une protéine adaptatrice enrichie dans les cellules lymphoïdes, qui coordonne la transduction du signal en aval des récepteurs de l’antigène. Dans les lymphocytes T, TESPA1 contribue à la signalisation proximale du TCR et à la mobilisation du calcium en reliant l’engagement du récepteur aux voies dépendantes de PLCγ et à la libération de Ca²⁺ par le réticulum endoplasmique, façonnant ainsi les programmes d’activation et la sélection des thymocytes. Elle est également impliquée dans la signalisation du récepteur des lymphocytes B et dans des réseaux plus larges de communication entre cellules immunitaires, qui influencent les réponses cytokiniques et la différenciation. Des altérations de l’activité de TESPA1 ont été associées à des phénotypes de dérégulation immunitaire, notamment une susceptibilité à des mécanismes de maladies auto-immunes et inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des seuils de signalisation et de la fonction lymphocytaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TESPA1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TESPA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TESPA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TESPA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TESPA1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TESPA1 pour l'étude de la signalisation de TESPA1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TESPA1 essentiels à la fonction de TESPA1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TESPA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TESPA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TESPA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TESPA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TESPA1 plasmide HDR (h) et le TESPA1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TESPA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TESPA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.