Plásmido CRISPR de Activación (h2) TEM8: sc-404903-ACT-2

El gen humano ANTXR1 codifica el marcador endotelial tumoral 8 (TEM8), un receptor de superficie celular para la toxina del ántrax que funciona como una proteína de adhesión e interacción con la matriz, implicada en el comportamiento de las células endoteliales y en la remodelación tisular. TEM8 se une a componentes de la matriz extracelular y contribuye a la organización del citoesqueleto y a la endocitosis mediada por receptores, vinculando la actividad de ANTXR1 con programas angiogénicos y con la señalización del microambiente. Estudios genéticos y funcionales asocian ANTXR1 con fenotipos del desarrollo vascular y con la desregulación de la matriz extracelular, con relevancia para la vasculatura asociada a tumores y para trastornos que afectan la homeostasis del tejido conectivo. La edición génica de ANTXR1 permite la investigación mecanística de las vías de tráfico y adhesión dependientes de TEM8, el análisis de las interacciones endotelio–matriz y el desarrollo de modelos celulares isogénicos para estudios de vías y genómica funcional.

TEM8 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANTXR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TEM8 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANTXR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANTXR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TEM8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANTXR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TEM8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TEM8 en células tumorales con expresión de ANTXR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.