Plasmide CRISPR d'Activation (h2) TEM8: sc-404903-ACT-2

Le gène humain ANTXR1 code le marqueur endothélial tumoral 8 (TEM8), un récepteur de la toxine de l’anthrax présent à la surface cellulaire, qui agit comme une protéine d’adhésion et d’interaction avec la matrice, impliquée dans le comportement des cellules endothéliales et le remodelage tissulaire. TEM8 se lie à des composants de la matrice extracellulaire et contribue à l’organisation du cytosquelette ainsi qu’à l’endocytose médiée par les récepteurs, reliant l’activité d’ANTXR1 aux programmes angiogéniques et à la signalisation du microenvironnement. Des études génétiques et fonctionnelles associent ANTXR1 à des phénotypes de développement vasculaire et à une dérégulation de la matrice extracellulaire, avec une pertinence pour la vascularisation associée aux tumeurs et pour des troubles affectant l’homéostasie du tissu conjonctif. L’édition du gène ANTXR1 permet d’explorer les mécanismes des voies de trafic intracellulaire et d’adhésion dépendantes de TEM8, d’analyser les interactions endothélium–matrice et de développer des modèles cellulaires isogéniques destinés à des études de voies de signalisation et de génomique fonctionnelle.

TEM8 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANTXR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TEM8 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANTXR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANTXR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TEM8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANTXR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TEM8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TEM8 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANTXR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.