Plasmide CRISPR/Cas9 KO TEM1 (m): sc-427713

Présentation

Cd248 code le marqueur endothélial tumoral 1 (TEM1), une glycoprotéine transmembranaire de type I enrichie dans les péricytes activés, les fibroblastes stromaux et les cellules mésenchymateuses associées au système vasculaire. Dans les tissus murins, TEM1 contribue aux interactions cellule–matrice et au remodelage périvasculaire, en intégrant des signaux liés à l’organisation de la matrice extracellulaire, à la dynamique d’adhésion et à des programmes migratoires qui soutiennent des microenvironnements angiogéniques et fibrosants. L’expression de Cd248 est fréquemment associée à l’activation du stroma dans des contextes inflammatoires et néoplasiques, où une altération du dialogue péricytes–endothélium peut influencer la stabilisation des vaisseaux et le remodelage tissulaire. En conséquence, Cd248 est largement étudié dans des modèles de biologie du stroma tumoral, de réparation des plaies et de voies liées à la fibrose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TEM1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd248 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd248, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd248 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TEM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd248 pour l'étude de la signalisation de TEM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd248 essentiels à la fonction de TEM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd248 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TEM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TEM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd248. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TEM1 plasmide HDR (m) et le TEM1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd248 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd248 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.