Plasmide CRISPR d'Activation (h) TEL: sc-402207-ACT

ETV6 (TEL) est un répresseur transcriptionnel de la famille ETS, essentiel au maintien de l’homéostasie des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, à l’engagement de lignée et au maintien de la stabilité génomique. Grâce à son domaine d’oligomérisation PNT et à son domaine ETS de liaison à l’ADN, TEL coordonne des programmes transcriptionnels qui structurent le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et les voies de survie, notamment en régulant des réseaux de signalisation sensibles aux cytokines. L’altération de la fonction d’ETV6 est fortement associée à la biologie des hémopathies, en particulier via des fusions géniques récurrentes et des lésions perte de fonction qui modifient la régulation transcriptionnelle et l’état de la chromatine. Ces caractéristiques font de TEL une cible largement étudiée pour analyser le reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, l’évolution clonale et les mécanismes du développement des cellules sanguines.

TEL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ETV6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TEL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ETV6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ETV6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TEL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ETV6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TEL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TEL dans les cellules tumorales présentant une expression de ETV6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.