TEF-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423328

Descripción general

Tead3 codifica TEF-5, un factor de transcripción con dominio TEA/ATTS que se asocia con coactivadores como YAP/TAZ para regular programas de expresión génica impulsados por potenciadores (enhancers) que controlan la proliferación celular, la supervivencia y la especificación de linaje. En el ratón, TEF-5 contribuye al patrón de desarrollo y al crecimiento de los órganos al integrar señales de la vía Hippo con respuestas transcripcionales dependientes del contexto. La actividad de la familia TEAD se vincula ampliamente con la mecanotransducción y con estados de células madre/progenitoras, lo que convierte a Tead3 en un nodo relevante para estudiar el control del crecimiento y la homeostasis tisular. La desregulación del circuito transcripcional TEAD–YAP/TAZ se asocia con fenotipos tumorigénicos y con una regeneración aberrante en múltiples sistemas modelo, lo que respalda su uso en investigaciones de vías y mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TEF-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tead3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tead3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tead3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TEF-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tead3 para la investigación de la señalización de TEF-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tead3 críticos para la función de TEF-5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tead3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TEF-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TEF-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tead3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TEF-5 (m) y el plásmido HDR TEF-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tead3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tead3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.