TEF-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-423329-KO-2

Descripción general

Tead4 codifica el factor de transcripción TEF-3, una proteína de unión al ADN con dominio TEA/ATTS que se asocia con coactivadores como YAP/TAZ para regular programas génicos que controlan la proliferación, la supervivencia y las decisiones sobre el destino celular. Durante el desarrollo del ratón, TEAD4 es un determinante clave de la especificación del trofoectodermo y contribuye a la organización epitelial y al compromiso de linaje mediante una transcripción sensible a la vía Hippo. La actividad de TEF-3 integra señales mecánicas y la señalización de quinasas aguas arriba para modular genes diana implicados en el control del crecimiento y la diferenciación. La desregulación de la señalización de la familia TEAD se ha relacionado con alteraciones de la homeostasis tisular y con programas transcripcionales oncogénicos, lo que convierte a Tead4 en un nodo útil para estudiar la regulación transcripcional dependiente del contexto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TEF-3 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tead4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tead4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tead4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TEF-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tead4 para la investigación de la señalización de TEF-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tead4 críticos para la función de TEF-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tead4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TEF-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TEF-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tead4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TEF-3 (m) y el plásmido HDR TEF-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tead4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tead4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.