Plasmide CRISPR/Cas9 KO TEF-3 (m2): sc-423329-KO-2

Présentation

Tead4 code le facteur de transcription TEF-3, une protéine de liaison à l’ADN portant un domaine TEA/ATTS, qui s’associe à des coactivateurs tels que YAP/TAZ pour réguler des programmes géniques contrôlant la prolifération, la survie et les décisions de destinée cellulaire. Au cours du développement chez la souris, TEAD4 est un déterminant clé de la spécification du trophectoderme et contribue à l’organisation épithéliale ainsi qu’à l’engagement de lignée via une transcription sensible à la voie Hippo. L’activité de TEF-3 intègre des signaux mécaniques et la signalisation des kinases en amont afin de moduler des gènes cibles impliqués dans le contrôle de la croissance et la différenciation. Une dérégulation de la signalisation de la famille TEAD a été associée à une altération de l’homéostasie tissulaire et à des programmes transcriptionnels oncogéniques, faisant de Tead4 un nœud utile pour étudier une régulation transcriptionnelle dépendante du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TEF-3 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tead4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tead4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tead4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TEF-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tead4 pour l'étude de la signalisation de TEF-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tead4 essentiels à la fonction de TEF-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tead4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TEF-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TEF-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tead4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TEF-3 plasmide HDR (m) et le TEF-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tead4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tead4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.