Plasmide CRISPR/Cas9 KO TECPR2 (h): sc-411378

Présentation

TECPR2 (tectonin beta-propeller repeat containing 2) code une grande protéine échafaudage cytosolique impliquée dans le trafic membranaire lié à l’autophagie et dans la protéostasie. Grâce à ses interactions avec la machinerie autophagique, TECPR2 facilite la prise en charge du cargo et des étapes de transport vésiculaire qui influencent l’élimination des protéines mal repliées et des organites endommagés, des processus centraux pour l’homéostasie neuronale. La perturbation génétique de TECPR2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui concorde avec un rôle dans le maintien de types cellulaires à longue durée de vie ayant une forte exigence en protéostasie. TECPR2 est donc pertinente pour l’étude de la régulation de l’autophagie, du trafic intracellulaire et des voies de réponse au stress dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TECPR2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TECPR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TECPR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TECPR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TECPR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TECPR2 pour l'étude de la signalisation de TECPR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TECPR2 essentiels à la fonction de TECPR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TECPR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TECPR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TECPR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TECPR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TECPR2 plasmide HDR (h) et le TECPR2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TECPR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TECPR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.