Plasmide Double Nickase (h) TdT: sc-406822-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TdT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TdT Double Nickase (h) et le plasmide TdT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DNTT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TdT Antibody (C-11): sc-393710
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TdT | sc-406822-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TdT | sc-406822-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La DNA nucléotidyl-exotransférase (DNTT) code la désoxynucléotidyl transférase terminale (TdT), une ADN polymérase spécialisée qui ajoute des nucléotides non matrice aux extrémités de l’ADN lors de la recombinaison V(D)J. L’activité de la TdT accroît la diversité jonctionnelle des gènes des immunoglobulines et des récepteurs des lymphocytes T, ce qui l’associe à la réparation programmée des cassures double brin et au traitement des extrémités dans le cadre de la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ). Son expression est largement restreinte aux lymphocytes en cours de développement, faisant de DNTT un déterminant clé de la formation du répertoire immunitaire adaptatif. Une expression dérégulée de la TdT est largement utilisée comme marqueur moléculaire des états lymphoïdes immatures et est pertinente pour l’étude de la biologie des hémopathies malignes lymphoïdes et des défauts de réparation de l’ADN.
TdT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNTT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNTT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNTT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNTT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.