Plásmido Doble Nickase (h) TdT: sc-406822-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TdT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TdT (h) y el plásmido de doble nickasa TdT (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DNTT. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TdT Anticuerpo (C-11): sc-393710
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TdT | sc-406822-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TdT | sc-406822-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La DNA nucleotidiltransferasa terminal (DNTT) codifica la transferasa terminal de desoxinucleotidilos (TdT), una polimerasa de ADN especializada que añade nucleótidos no templados a los extremos del ADN durante la recombinación V(D)J. La actividad de TdT incrementa la diversidad de las uniones en los genes de las inmunoglobulinas y del receptor de células T, lo que la vincula con la reparación programada de roturas de doble cadena y el procesamiento de extremos dentro del marco de la unión de extremos no homóloga (NHEJ). Su expresión está en gran medida restringida a linfocitos en desarrollo, lo que convierte a DNTT en un determinante clave de la formación del repertorio inmunitario adaptativo. La expresión desregulada de TdT se utiliza ampliamente como marcador molecular de estados linfoides inmaduros y es relevante para estudios sobre la biología de las neoplasias linfoides y la reparación aberrante del ADN.
TdT El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNTT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNTT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNTT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNTT alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.