Plasmide CRISPR d'Activation (h) TDP2: sc-403902-ACT

La TDP2 humaine (tyrosyl‑DNA phosphodiestérase 2) est une enzyme de réparation de l’ADN qui élimine les adduits 5′‑phosphotyrosyle générés par l’activité abortive de la topoisomérase II, rétablissant ainsi des extrémités d’ADN ligatables après la formation de cassures double brin. Cette activité soutient la stabilité du génome et la survie cellulaire après un stress réplicatif et une exposition à des agents génotoxiques, en s’inscrivant dans le réseau plus large de réparation des cassures double brin, coordonné avec la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ) et des facteurs apparentés de maturation des extrémités. TDP2 contribue aussi à la réplication de certains virus à ARN via des rôles liés au décrochage de VPg dans certains systèmes viraux, soulignant sa pertinence dans les interactions hôte–pathogène. Une fonction altérée de TDP2 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des syndromes de déficit de réparation de l’ADN, ce qui en fait un point d’entrée utile pour des études mécanistiques du maintien du génome.

TDP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TDP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TDP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TDP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TDP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TDP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TDP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TDP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TDP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TDP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.