Partículas Lentivirales de Activación (h2) TDO2: sc-402482-LAC-2

El TDO2 humano (triptófano 2,3-dioxigenasa) codifica una enzima dependiente de hemo que cataliza el primer paso y el paso limitante de la velocidad del catabolismo del triptófano a través de la vía de la quinurenina, regulando así la disponibilidad celular de triptófano y la producción posterior de metabolitos inmunomoduladores y neuroactivos. La actividad de TDO2 conecta la detección de nutrientes y la homeostasis metabólica hepática con el equilibrio redox y las redes de señalización influenciadas por las quinureninas, con consecuencias para la regulación inmunitaria, las respuestas al estrés y el flujo de precursores de neurotransmisores. La expresión desregulada de TDO2 o la alteración del rendimiento de la vía se han implicado en la evasión inmunitaria del cáncer, en afecciones inflamatorias y en contextos de enfermedades neuropsiquiátricas o neurodegenerativas en los que se observa un metabolismo triptófano–quinurenina alterado. La edición génica de TDO2 permite estudios mecanísticos de la reprogramación metabólica, la señalización dependiente de quinurenina y las interacciones entre células tumorales, hepatocitos y células inmunitarias en modelos celulares humanos relevantes.

Las partículas de activación lentiviral TDO2 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TDO2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TDO2 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TDO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TDO2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TDO2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.