Plasmide CRISPR/Cas9 KO TDG (m): sc-423321

Présentation

La TDG (thymine DNA glycosylase) de souris est une enzyme de réparation de l’ADN par excision de base qui reconnaît et excise la thymine ou l’uracile appariés de façon incorrecte avec la guanine, contribuant ainsi à résoudre les mésappariements G:T issus de la désamination et d’erreurs de réplication. La TDG participe également à la déméthylation active de l’ADN en traitant des dérivés oxydés de la 5‑méthylcytosine générés par les enzymes TET, ce qui l’associe à la régulation épigénétique et au contrôle transcriptionnel lié à la chromatine. Par ces activités, la TDG contribue à la stabilité du génome, au maintien des profils de méthylation de l’ADN et aux réponses cellulaires aux dommages de l’ADN. Une altération de la fonction de TDG a été associée à des états épigénétiques dérégulés et à des processus mutationnels pertinents pour l’étude de la biologie du cancer, des programmes développementaux et de la maintenance du génome en contexte inflammatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TDG (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tdg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tdg, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tdg à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TDG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tdg pour l'étude de la signalisation de TDG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tdg essentiels à la fonction de TDG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tdg pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TDG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TDG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tdg. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TDG plasmide HDR (m) et le TDG (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tdg pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tdg définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.