Plasmide Double Nickase (h) TDAG8: sc-416613-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TDAG8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TDAG8 Double Nickase (h) et le plasmide TDAG8 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR65. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TDAG8 | sc-416613-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TDAG8 | sc-416613-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GPR65** code **TDAG8**, un récepteur couplé aux protéines G sensible aux protons, enrichi dans les contextes immunitaires et hématopoïétiques, qui se couple principalement à **Gs** et à la signalisation via l’**AMPc** en réponse à l’acidose extracellulaire. TDAG8 intègre des signaux dépendants du pH au sein des microenvironnements inflammatoires, influençant l’activation des leucocytes, les programmes de cytokines et les décisions de survie cellulaire, et s’articule avec des voies plus larges pilotées par des GPCR qui modulent les réponses **MAPK** et transcriptionnelles. Une régulation altérée de **GPR65** a été étudiée dans des affections caractérisées par une acidose tissulaire et une signalisation immunitaire dérégulée, notamment dans des contextes inflammatoires et auto-immuns, ainsi que dans la biologie du microenvironnement tumoral. Ces caractéristiques font de TDAG8 un point d’entrée utile pour étudier comment le pH extracellulaire remodèle les réseaux de signalisation et le comportement des cellules immunitaires.
TDAG8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR65 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR65. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR65. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR65.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.