Plasmide CRISPR/Cas9 KO TCP-11 (m): sc-423314

Présentation

Tcp11 code la protéine associée aux spermatozoïdes TCP-11, un facteur fortement exprimé dans les testicules, impliqué dans les stades tardifs de la spermatogenèse et dans la maturation fonctionnelle des spermatozoïdes. TCP-11 a été associée à des processus qui façonnent la structure du flagelle et régulent la motilité, influençant la signalisation liée à la capacitation et la capacité de fécondation. Dans des modèles murins, une expression ou une fonction altérée de Tcp11 est associée à une diminution de la qualité du sperme et à des phénotypes de sous-fertilité, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les contributions génétiques aux troubles de la reproduction masculine. Son profil d’expression restreint soutient également son utilisation comme marqueur de la différenciation des cellules germinales et dans la recherche en toxicologie de la reproduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TCP-11 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tcp11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tcp11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tcp11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TCP-11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tcp11 pour l'étude de la signalisation de TCP-11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tcp11 essentiels à la fonction de TCP-11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tcp11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TCP-11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TCP-11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tcp11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TCP-11 plasmide HDR (m) et le TCP-11 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tcp11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tcp11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.