Plasmide CRISPR d'Activation (h) TCL-1A: sc-402028-ACT

TCL1A code la protéine humaine T‑cell leukemia/lymphoma 1A (TCL‑1A), un régulateur cytoplasmique de la signalisation des kinases capable de potentialiser l’activité de la voie PI3K–AKT via des interactions protéine‑protéine. TCL‑1A est principalement exprimée dans les compartiments lymphoïdes précoces et contribue au développement des lymphocytes, à leur survie et aux programmes de signalisation métabolique. Une expression dérégulée de TCL1A a été associée à une prolifération aberrante des cellules B et T et est fréquemment étudiée dans le contexte des hémopathies malignes, où une altération du contrôle transcriptionnel et apoptotique dépendant d’AKT peut influencer les phénotypes oncogéniques. En tant que modulateur pertinent pour cette voie, TCL1A est couramment analysé afin de cartographier les régulateurs en amont et les effecteurs en aval de la signalisation AKT dans les cellules immunitaires.

TCL-1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TCL1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TCL-1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TCL1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TCL1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TCL-1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TCL1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TCL-1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TCL-1A dans les cellules tumorales présentant une expression de TCL1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.