TCF7L2/TCF4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400607-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TCF7L2/TCF4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TCF7L2/TCF4 Double-Nickase-Plasmid (h) und TCF7L2/TCF4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TCF7L2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TCF7L2/TCF4: sc-166699
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TCF7L2/TCF4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400607-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TCF7L2/TCF4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400607-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TCF7L2 (auch als TCF4 bekannt) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit High-Mobility-Group-(HMG)-Box, der als zentraler nukleärer Effektor der kanonischen Wnt/β‑Catenin-Signalübertragung fungiert. Durch die Interaktion mit β‑Catenin und Ko-Regulatoren moduliert TCF7L2 Transkriptionsprogramme, die Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Differenzierung in verschiedenen Gewebekontexten steuern, darunter das intestinale Epithel und der endokrine Pankreas. Die TCF7L2-abhängige Regulation beeinflusst die Chromatinzugänglichkeit und integriert Signale aus Entwicklungs- und Stoffwechselwegen, um eine kontextspezifische Genexpression zu formen. Genetische Variation und eine dysregulierte Aktivität von TCF7L2 wurden mit metabolischen Merkmalen und einem erhöhten Risiko für Typ‑2‑Diabetes in Verbindung gebracht; zudem wird eine aberrante Wnt/TCF-abhängige Transkriptionsausgabe häufig in der Krebs- und Stammzellbiologie untersucht.
TCF7L2/TCF4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TCF7L2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TCF7L2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TCF7L2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TCF7L2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.