TCF7L2/TCF4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400607-ACT

TCF7L2 (auch als TCF4 bekannt) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit HMG-DNA-Bindedomäne (High-Mobility-Group), der als zentraler nukleärer Effektor des kanonischen Wnt/β‑Catenin-Signalwegs fungiert. Durch die Interaktion mit β‑Catenin an TCF/LEF-Antwortelementen reguliert TCF7L2 Genprogramme, die Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation, Differenzierung und die metabolische Homöostase steuern. In menschlichen Geweben beeinflusst die TCF7L2-Aktivität endokrine und epitheliale Transkriptionsnetzwerke und wird häufig im Zusammenhang mit der Glukoseregulation und der Entwicklungs-Patternbildung untersucht. Genetische und Expressionsveränderungen in TCF7L2 wurden mit metabolischen Merkmalen und mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht, was seine breite Relevanz für krankheitsassoziierte regulatorische Schaltkreise unterstreicht.

TCF7L2/TCF4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TCF7L2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TCF7L2/TCF4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TCF7L2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TCF7L2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TCF7L2/TCF4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TCF7L2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TCF7L2/TCF4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TCF7L2/TCF4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TCF7L2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.