Plasmide CRISPR d'Activation (h) TCF7L2/TCF4: sc-400607-ACT

TCF7L2 (également appelé TCF4) code un facteur de transcription à domaine HMG (High Mobility Group) se liant à l’ADN, qui constitue un effecteur nucléaire majeur de la signalisation canonique Wnt/β-caténine. En s’associant à la β-caténine sur les éléments de réponse TCF/LEF, TCF7L2 régule des programmes géniques contrôlant les choix de destinée cellulaire, la prolifération, la différenciation et l’homéostasie métabolique. Dans les tissus humains, l’activité de TCF7L2 influence des réseaux transcriptionnels endocriniens et épithéliaux et est fréquemment étudiée dans le contexte de la régulation du glucose et de la mise en place des patrons de développement. Des altérations génétiques et d’expression de TCF7L2 ont été associées à des traits métaboliques et à de multiples cancers, ce qui souligne sa pertinence étendue dans des circuits de régulation liés aux maladies.

TCF7L2/TCF4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TCF7L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TCF7L2/TCF4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TCF7L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TCF7L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TCF7L2/TCF4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TCF7L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TCF7L2/TCF4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TCF7L2/TCF4 dans les cellules tumorales présentant une expression de TCF7L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.