Plasmide CRISPR d'Activation (h) TCEA3: sc-408517-ACT

TCEA3 code le facteur d’élongation transcriptionnelle A3, une protéine de la famille TFIIS qui s’associe à l’ARN polymérase II afin de stimuler le clivage du transcrit et de « sauver » les complexes d’élongation en retrait (backtracked), soutenant ainsi une synthèse productive d’ARNm. En modulant la fidélité de l’élongation et sa reprise, TCEA3 contribue à l’homéostasie transcriptionnelle globale et influence des programmes cellulaires liés à la prolifération, à la différenciation et aux réponses au stress. Une dérégulation du contrôle de l’élongation par Pol II et de l’activité TFIIS a été impliquée dans des défauts de stabilité du génome et des états transcriptionnels altérés observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment le cancer et des troubles du développement. En tant que régulateur transcriptionnel, TCEA3 constitue une cible utile pour étudier comment les facteurs d’élongation ajustent les réseaux d’expression génique et les sorties de voies de signalisation dans les cellules humaines.

TCEA3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TCEA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TCEA3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TCEA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TCEA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TCEA3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TCEA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TCEA3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TCEA3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TCEA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.