Partículas Lentivirales de Activación (h) TBX2: sc-403078-LAC

TBX2 codifica un factor de transcripción de la familia T-box que se une a elementos de ADN específicos de secuencia para regular programas de expresión génica del desarrollo y la progresión del ciclo celular. En células humanas, TBX2 a menudo funciona como un represor transcripcional que ayuda a controlar la proliferación, la evasión de la senescencia y la especificación de linaje mediante la coordinación con complejos de remodelación de cromatina y correpresores. Su actividad se interseca con vías que gobiernan el control de G1/S y la diferenciación, y se ha informado de una expresión desregulada de TBX2 en múltiples contextos tumorales, donde puede influir en el crecimiento y en fenotipos invasivos. Como regulador nuclear, TBX2 se estudia con frecuencia por su papel en redes transcripcionales que moldean la organogénesis, la dinámica epitelio-mesénquima y programas de respuesta al estrés.

Las partículas de activación lentiviral TBX2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TBX2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TBX2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TBX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TBX2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TBX2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.