Plasmide CRISPR d'Activation (h) TBX15: sc-405994-ACT

Le gène humain **TBX15** code un facteur de transcription de la famille T-box qui régule des programmes de mise en place des structures au cours du développement et la spécification des lignages mésenchymateux, avec des rôles marqués dans la biologie des tissus squelettique et adipeux. En se liant à des motifs T-box et en coordonnant des réseaux transcriptionnels, TBX15 influence l’état de la chromatine et les programmes d’expression génique en aval qui façonnent les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et la morphogenèse tissulaire. Des modifications de l’expression de TBX15 et des variations de sa régulation ont été associées à la répartition du tissu adipeux et à des phénotypes métaboliques, et une activité dérégulée de TBX15 est étudiée dans des contextes d’anomalies du développement et de reprogrammation transcriptionnelle liée au cancer. Ces caractéristiques font de TBX15 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel de l’engagement de lignée et la régulation génique spécifique des tissus.

TBX15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TBX15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TBX15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TBX15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TBX15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TBX15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TBX15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TBX15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TBX15 dans les cellules tumorales présentant une expression de TBX15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.