Plasmide CRISPR d'Activation (h) TBL1Y: sc-404389-ACT

TBL1Y code une protéine de type transducine bêta liée au chromosome Y, qui agit comme composant de la machinerie corépresseur transcriptionnelle NCoR/SMRT, en aidant à coupler des programmes de répression et d’activation associés à la chromatine à une régulation des gènes dépendante des signaux. Par ses interactions avec des enzymes de modification des histones et des facteurs de transcription, des complexes apparentés à TBL1Y influencent la transcription par l’ARN polymérase II, la signalisation des récepteurs nucléaires et la dynamique d’expression des gènes du développement. Bien que moins caractérisées que le paralogue TBL1XR1, les protéines de la famille TBL1 sont largement impliquées dans des voies qui gouvernent les décisions de destin cellulaire, la signalisation inflammatoire et le remaniement oncogénique des programmes transcriptionnels. L’étude de TBL1Y soutient les recherches sur les réseaux régulateurs liés au sexe, la biologie des corégulateurs transcriptionnels et la dérégulation de l’expression génique dépendante de la chromatine dans des contextes pertinents pour les maladies.

TBL1Y Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TBL1Y sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TBL1Y Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TBL1Y dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TBL1Y, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TBL1Y. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TBL1Y natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TBL1Y au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TBL1Y dans les cellules tumorales présentant une expression de TBL1Y silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.