Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tau: sc-400136-ACT

Le gène humain MAPT code la protéine tau associée aux microtubules, un facteur principalement neuronal qui se lie aux microtubules et les stabilise afin de soutenir le transport axonal, la croissance des neurites et l’organisation du cytosquelette. La fonction de tau est régulée par des modifications post-traductionnelles, en particulier la phosphorylation, qui module son affinité pour les microtubules et influence la dynamique du cytosquelette ainsi que le trafic intracellulaire. La dérégulation de l’expression de MAPT et de l’homéostasie de tau est liée à des processus neurodégénératifs et à l’agrégation protéique observée dans les tauopathies, notamment la maladie d’Alzheimer et la démence frontotemporale. MAPT est donc largement étudié dans les voies contrôlant la stabilité des microtubules, l’intégrité synaptique, la protéostase et les réponses au stress associées à la neuroinflammation.

Tau Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tau Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tau. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tau au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tau dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.