Particules Lentivirales d'Activation (h) TARSL1: sc-410152-LAC

TARS2 code la thréonyl‑ARNt synthétase mitochondriale TARSL1, une ligase aminoacyl‑ARNt indispensable à l’aminoacylation de l’ARNtThr mitochondrial et au maintien de la traduction des sous‑unités de la phosphorylation oxydative (OXPHOS) codées par l’ADNmt. En soutenant la synthèse protéique mitochondriale, TARSL1 contribue à l’assemblage de la chaîne respiratoire, à la production d’ATP et aux réponses intégrées au stress mitochondrial qui modulent le métabolisme et les décisions de destinée cellulaire. Les perturbations de la traduction mitochondriale sont étroitement associées à une bioénergétique déficiente, à une homéostasie redox altérée et à l’activation de voies de signalisation compensatoires, ce qui rend la fonction de TARS2/TARSL1 pertinente pour l’étude des dysfonctionnements mitochondriaux dans la neurodégénérescence, les maladies cardiométaboliques et le métabolisme tumoral. En tant que composant central de l’expression génique mitochondriale, TARSL1 constitue également un point d’entrée mécanistique pour étudier la communication mito‑nucléaire et le contrôle translationnel dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TARSL1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TARS2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TARSL1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TARS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TARSL1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TARS2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.