Plasmide CRISPR d'Activation (h) TARC: sc-401905-ACT

CCL17 code la chimiokine thymique et régulée par l’activation (TARC), une chimiokine CC sécrétée qui favorise la migration dirigée des lymphocytes T exprimant CCR4, notamment des sous-populations polarisées Th2, vers les sites d’inflammation. En modelant le trafic des leucocytes et la communication entre cellules dendritiques et lymphocytes T, TARC contribue au positionnement des cellules immunitaires dans les tissus et à la coordination des réponses induites par les cytokines au sein du réseau de signalisation des chimiokines. Une expression dérégulée de CCL17/TARC est fréquemment étudiée dans l’inflammation allergique et d’autres pathologies à médiation immunitaire, où des gradients chimiotactiques altérés influencent l’infiltration immunitaire et le remodelage tissulaire. Dans les systèmes modèles humains, CCL17 constitue un marqueur facilement exploitable de l’activation des circuits inflammatoires et un nœud permettant d’interroger le comportement de l’axe chimiokine–récepteur.

TARC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCL17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TARC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCL17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCL17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TARC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCL17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TARC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TARC dans les cellules tumorales présentant une expression de CCL17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.