Plasmide CRISPR d'Activation (h) TAPBPL: sc-409990-ACT

TAPBPL (TAP binding protein-like) est une protéine immunorégulatrice résidente du réticulum endoplasmique qui module le chargement des peptides et le contrôle qualité des complexes du CMH de classe I. En interagissant avec des composants de la machinerie de présentation de l’antigène, TAPBPL contribue à façonner le répertoire et la stabilité des complexes peptide–CMH I à la surface cellulaire, influençant la reconnaissance par les lymphocytes T CD8+. Son activité relie la protéostasie du RE, l’édition des peptides et les voies de surveillance immunitaire, souvent altérées dans des contextes d’échappement immunitaire. Une présentation antigénique dérégulée associée à la fonction de TAPBPL est donc pertinente pour les études en immunologie tumorale, en biologie des infections et en signalisation inflammatoire.

TAPBPL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TAPBPL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TAPBPL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TAPBPL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TAPBPL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TAPBPL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TAPBPL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TAPBPL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TAPBPL dans les cellules tumorales présentant une expression de TAPBPL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.